STUDYING THE REGULATION OF 11β-HSD1 EXPRESSION AND ACTIVITY IN PERIPHERAL BLOOD MONOCYTES

Il controllo periferico di infiammazione comporta la conversione del cortisone inattivo in cortisolo da parte dell'11β-HSDs. I glucocorticoidi come il cortisone o prednisone possono funzionare in terapia solo se sono convertiti in glucocorticoidi attivi (cortisolo e prednisolone) da parte dei intracellulari enzimi 11β-HSDs. L'enzima 11β-HSD1 è bidirezionale, ma attiva soprattutto glucocorticoidi, mentre l'enzima 11β-HSD2 è unidirezionale e un potente disattivatore di glucocorticoide. I livelli di 11β-HSD1 sono altamente dipendenti dallo stato di differenziazione cellulare e modulata dall'ambiente di citochina. Quindi, studiando l'influenza delle citochine sull'attività 11β-HSD1 e di espressione potrebbe fornire preziose informazioni per migliorare le opzioni terapeutiche coinvolte nel ridurre l'infiammazione.Diversi studi hanno dimostrato il ruolo della citochina pro-infiammatoria IL-17 nella resitenza ai glucocorticoidi (GC) ma il meccanismo alla base di questa processo non è ancora chiaro. Per capire meglio questo abbiamo testato l'effetto di IL-17 nelle due classi principali di monociti, CD14 ++ CD16- (CD14) e CD14 + CD16 + (CD16). Le azioni anti-infiammatorie di IL-4 sono ben stabiliti attraverso risultati precedenti. Tuttavia, l'esatto meccanismo che utilizza per diminuire la produzione di citochine pro-inflammatorie attraverso monociti e macrofagi è poco conosciuta. In questo studio, abbiamo esaminato l'effetto di IL-4 nell'induzione di 11β- HSD1 nelle due classi principali di monociti, CD14 ++ CD16- (CD14) e CD14 + CD16 + (CD16). E 'ben noto che i macrofagi M2 esprimono 11β-HSD1, ma non si sa se M2 è un prerequisito per l'espressione genica 11β-HSD1. Quindi, dopo aver IL-4 stimolazione di CD14 e CD16 monociti abbiamo analizzato i fenotipi di queste due classi di monociti secondo l'espressione di marcatori M1 e M2 mediante citometria FACS. Inoltre, sono ancora da svelare i meccanismi molecolari alla base della induzione di 11β-HSD1 da parte del IL-4. Pertanto, abbiamo studiato varie regioni del promotore 11β-HSD1 per capire come IL-4 regola l'espressione e l'attività dei monociti isolati dal sangue

The peripheral control of inflammation involves the conversion of inactive cortisone to cortisol by 11β-hydroxysteroid dehydrogenases (11β-HSDs). Glucocorticoids such as cortisone or prednisone may work therapeutically only if they are converted to active glucocorticoids (cortisol and prednisolone) by the intracellular 11β-HSD enzymes. The 11β-HSD1 enzyme is bidirectional, but primarily activates glucocorticoids, whereas the 11β-HSD2 enzyme is unidirectional and a powerful glucocorticoid inactivator. The levels of 11β-HSD1 are highly dependent upon the cellular differentiation status and modulated by the cytokine environment. Hence, studying the influence of cytokines on 11β-HSD1 activity and expression could provide valuable insights to improve the therapeutic options involved in reducing inflammation. Several studies have reported the role of the pro-inflammatory cytokine IL-17 in glucocorticoid (GC) insensitivity but the mechanism underlying this is still unclear. In order to understand this better we tested the effect of IL-17 in the two main classes of monocytes, CD14++ CD16- (CD14) and CD14+ CD16+ (CD16). The anti-inflammatory actions of IL-4 are well established through earlier findings. However, the exact mechanism it uses to downregulate the pro- inflammatory cytokine production through monocytes and macrophages is poorly understood. In this study, we examined the effect of IL-4 in the induction of 11β- HSD1 in the two main classes of monocytes, CD14++ CD16- (CD14) and CD14+ CD16+ (CD16). It is well-known that M2 macrophages express 11β-HSD1 but it is not known if M2 is a prerequisite for 11β-HSD1 gene expression. Hence, after IL- 4 stimulation of CD14 and CD16 monocytes we analyzed the monocyte subpopulation phenotypes according to the expression of M1 and M2 markers by flow cytometry. In addition, the molecular mechanisms underlying the induction of 11β-HSD1 by IL-4 are still to be unravelled. Therefore, we studied various regions of the 11β-HSD1 promoter to understand how IL-4 regulates its expression and activity in peripheral blood monocytes.