Diagnostica molecolare per la sicurezza alimentare

Le zoonosi sono infezioni che possono essere trasmesse dagli animali all'uomo. Le zoonosi di tipo alimentare vengono trasmesse attraverso alimenti contaminati e rappresentano una seria e diffusa minaccia per la salute pubblica Lo scopo di questo progetto è lo sviluppo di test diagnostici basati sul rilevamento di sequenze di DNA specifiche per ciascun agente zoonotico. Fasi del progetto 1) Ottimizzazione del protocollo di estrazione del DNA di agenti patogeni da campioni di carne di maiale, manzo e pollo 2) Ottimizzazione dei test di PCR per l’ identificazione di agenti zoonotici quali Campylobacter, Listeria monocytogenes, Escherichia coli e Salmonella 3) Assemblaggio e ottimizzazione di kit per l'identificazione di specifici agenti zoonotici da utilizzarsi con un dispositivo di PCR portatile. Lo strumento è composto da un termoblocco per permettere di impostare temperature costanti (in fase di estrazione) o cicli termici (durante l’amplificazione). Lo strumento di PCR portatile contiene inoltre un fluorimetro in grado di leggere l’intensità di fluorescenza prima e dopo la reazione di PCR. L’aumento di fluorescenza è proporzionale alla quantità di agente infettivo presente nel campione. L’analisi è effettuabile agevolmente e rapidamente in qualsiasi luogo, il dispositivo infatti può essere alimentato anche da un semplice accendisigari per automobile.

The zoonotic deseases are infections that can be passed from animals to humans. The Zoonotic deseases can be transferred by eating contaminated food. Tha aim of this project is to develop diagnostic tests based on identification of specific sequences of DNA for each pathogen. The different phases of this project are : 1)Optimization of protocol for DNA extraction from samples of pig, bovine and chicken 2)Optimization of PCR tests to identify pathogenics like Campylobacter, Listeria monocytogenes, Escherichia coli and Salmonella 3) development of a kit to identify the pathogenics. This kit includes a portable device that allow to perform all diagnostic phases (DNA extraction, PCR and collecting fluorescence). The device includes termal cycler that allow to reach the correct temperature to perform the DNA extraction and PCR. The device also include an instrument that allow to collect fluorescence and allow to compare the fluoroscence of the sample before and after the PCR raection. The increase of fluotrecence is proprortional to concentration of pathogenic into the sample. The analysis it’s easy and it can be perfermed outside the laboratory by everyone.