Trombossano ed attivazione piastrinica: studio sulla variabilità interindividuale nella risposta all'aspirina

Il fallimento nella prevenzione di eventi cardiovascolari in pazienti ad elevato rischio cardiovascolare in trattamento cronico con aspirina (ASA) può essere attribuito alla incompleta inibizione della cicloossigenasi piastrinica. Per esplorare il ruolo funzionale della residua sintesi di trombossano (TX) A2, sono state valutate l’aggregazione piastrinica e il rilascio di TXB2 come indice di capacità sintetica piastrinica di TXA2. Sono stati studiati pazienti di ambo i sessi (n=80; F=26; età 67+7.3) affetti da diabete mellito (n=65) o pregresso evento cerebro- o cardiovascolare (n= 15) trattati con ASA, assunto quotidianamente per almeno sette giorni consecutivi, alla dose di 100 mg 12 ore prima dell’esecuzione dei prelievi. La media della concentrazione di TXB2 sierico ottenuto dopo formazione di coagulo ematico in tubo di vetro mantenuto a 37°C per un’ora era 3.37 ng/ml (95% CI: 2.31-4.45) ed in 8 casi era superiore a 10 ng/ml. Quando era aggiunta ai campioni di sangue aspirina 300 μmol/L prima dell’incubazione, la media delle concentrazioni di TXB2 ottenuto era significativamente più bassa (0.48 ng/mL, 0.29-0.67, P<0.001). In un sottogruppo di pazienti l’aggregazione piastrinica è stata valutata in piastrine lavate con metodo turbidimetrico utilizzando come agonista piastrinico acido arachidonico (AA, 1-10 μmol/L) da solo od in combinazione con epinefrina 10 μmol/L (EPI). Un’aggregazione piastrinica massimale eccedente il 25% è stata osservata solo in 4 di 50 pazienti utilizzando AA 10 μmol/L (media 14.8, 95% CI: 8.9-20.1) ed era abolita dall’aggiunta di ASA 300 μmol/L (8.7%, 8.1-9.4, P<0.05). utilizzando AA 10 μmol/L più EPI, si otteneva aggregazione piastrinica in 10 dei 50 soggetti (media 17.5%, 95% CI:12.2-22.8) ed anche in questo caso era prevenuta dall’aggiunta di ASA in vitro (9.4%, 8.7-10.1, P<0.005). Plottando la percentuale di aggregazione piastrinica con la concentrazione di TXB2 rilevata nel supernatante di ogni provetta di vetro non siliconato al termine del test di aggregazione, veniva a definirsi una curva dose-risposta a morfologia sigmoidale con un EC50 per aggregazione piastrinica indotta da AA più epinefrina di 26.5 ng/ml (95% CI: 12.2-57.3, R2=0.866, n=20). L’EC50 per aggregazione piastrinica indotta da AA era 215.3 ng/ml (115.4-401.6, R2=0.853, n=42). In conclusione, la residua sintesi di TXA2 in piastrine di pazienti ad elevato rischio cardiovascolare è osservata raramente e si associa ad attivazione piastrinica. La soglia per indurre aggregazione piastrinica potrebbe essere tuttavia variabile in funzione di diffrenti agonisti. Questo fenomeno potrebbe tradursi in vivo in una residua aggregabilità piastrinica in pazienti trattati con aspirina.

Failure in preventing cardiovascular events in high risk patients under chronic treatment with aspirin may be attributed to incomplete inhibition of platelet cyclooxygenase. To explore the functional role of residual thromboxane (TX) A2 biosynthesis, platelet aggregation was measured together with released TXB2 as index of platelet TXA2 synthetic capacity. Patient of either gender (n=80, 26 females, aged 67+7.3) with diabetes mellitus (n= 65) or clinically overt cardiovascular disease (previous stroke or myocardial infarction, n= 15) receiving a standard daily dose of aspirin (100 mg, given orally 12 hour before blood sampling for at least 7 days) were studied. Mean serum TXB2 concentration after clot formation in a glass tube at 37°C for 1 h, was 3.37 ng/mL (95% CI: 2.31-4.45) and exceeded 10 ng/mL in 8 cases. When aspirin 300 μmol/L was added to blood samples before incubation, mean TXB2 was significantly lower (0.48 ng/mL, 0.29-0.67, P<0.001). In a subset of patients platelet aggregation was evaluated in washed platelets using a turbidimetric method and arachidonic acid (AA, 1-10 μmol/L) alone or in combination with 10 μmol/L epinephrine (EPI) as platelet agonists. A maximal platelet aggregation exceeding 25% was observed only in 4 out of 50 patients using 10 μmol/L AA (mean:14.8, 95% CI: 8.9-20.1) and abolished by the addition of aspirin 300 μmol/L to the test tubes (8.7%, 8.1-9.4, P<0.05). Using AA 10 μmol/L plus EPI, platelet aggregation was observed in 10 out of 50 subject (mean:17.5%, 95%CI:12.2-22.8) and was also prevented by the addition of aspirin in vitro (9.4%, 8.7-10.1, P<0.005). When percentage of platelet aggregation was plotted against TXB2 concentration found in the supernatant of each tube at the end of the aggregation test, a sigmoid dose-response curve was defined, with an EC50 for platelet aggregation induced by AA plus EPI of 26.5 ng/mL (95% CI: 12.2-57.3, R2=0.866, n=20). The EC50 for AA-induced platelet aggregation was 215.3 ng/mL (95% CI 115.4-401.6, R2=0.853, n=42). In conclusion, a residual synthesis of TXA2 in platelet from patients at high cardiovascular risk is rarely observed and is associated with platelet activation. The threshold for platelet aggregation may however vary in response to different agonists, and this may translate in vivo into a residual platelet aggregability in aspirin-treated patients.