PROTEOMIC ANALYSIS OF BIOLOGICAL MATERIAL FROM WOMEN WITH ANTIPHOSPHOLIPID SYNDROME. A RETROSPECTIVE STUDY.

Obiettivo. Durante l'ultimo decennio è stato dibattuto il ruolo dell’attivazione del sistema del complemento nella patogenesi della Sindrome da anticorpi Anti Fosfolipidi (APS), tuttavia ad oggi non è stata ancora trovata una correlazione evidente con il fenotipo pro-infiammatorio e pro-coagulante tipico di questa malattia. È stato condotto uno studio retrospettivo su soggetti affetti da APS per valutare l'espressione di molecole solubili e locali del sistema del complemento e della cascata coagulativa ritenute coinvolte nella promozione di eventi trombotici e di complicanze cliniche legate alla gravidanza.Metodi. I livelli plasmatici delle molecole del sistema del complemento C5a e del complesso C5b-9, del Tissue Factor (TF) e del Tissue Factor Pathway Inhibitor (TFPI) di pazienti con APS e di donne sane sono stati analizzati mediante test ELISA. Campioni di placenta di pazienti con APS e controlli sani sono stati sottoposti ad analisi di western immunoblot con anticorpi specifici per il Recettore della componente 5a del complemento (C5aR), CD46 (MCP, Proteina Cofattore di Membrana), CD55 (DAF, Fattore di Accelerazione di Decadimento), CD59, p-selectina, TF e TFPI. È stata inoltre eseguita l’analisi delle mutazioni e dei polimorfismi nei geni regolatori del complemento.Risultati. Nei pazienti con APS, sia in condizioni di gravidanza che non, sono stati riscontrati livelli plasmatici di C5a, C5b-9 e TF maggiori rispetto ai soggetti sani. Nelle placente di donne con APS, i livelli di C5aR, C5b-9 e di p-selectina sono risultati maggiori rispetto ai controlli; al contrario, i livelli di CD46, CD55 e CD59 sono risultati inferiori rispetto ai soggetti sani. Dal momento che la gestione clinica della gravidanza in APS richiede una terapia anticoagulante (eparina), i livelli plasmatici e placentari di TF e TFPI hanno risentito di questo trattamento. Nei donatori di placenta affetti da APS non sono state riscontrate mutazioni o varianza allelica nei geni CD46, CD55 e CD59.Conclusioni. I nostri dati suggeriscono l’attivazione del complemento nei pazienti con APS, sia in condizioni di gravidanza che non, come supportato dall'incremento delle molecole chiave del sistema del complemento. In questo studio, gli elevati livelli di molecole del complemento attivato riscontrati nei soggetti con APS sono stati associati ad uno stato pro-infiammatorio e pro-coagulante. Una diminuzione della concentrazione di CD46, CD55 e CD59 a livello placentare può comprometterne la protezione locale, favorendo l’iperattivazione del complemento e causando infiammazione, trombosi, danni tissutali e la possibile morte fetale. Tuttavia sono necessari ulteriori studi per comprendere meglio i meccanismi coinvolti nella disregolazione del complemento nella APS.

Objective. During the last decade, the role of complement system activation in the pathogenesis of antiphospholipid syndrome (APS) has been debated but an evident correlation with the proinflammatory and procoagulant phenotype in this disease has never been found. We carried out a retrospective study on APS women to evaluate the expression of some soluble and local complement and coagulation molecules supposed to be involved in promoting thrombotic events and pregnancy-related clinical complications.Methods. Complement C5a and C5b-9 complex, Tissue Factor (TF) and Tissue Factor Pathway Inhibitor (TFPI) plasma levels of APS patients and matched healthy women were analyzed by ELISA assays. Placenta samples of APS patients and controls were subjected to immunoblotting analysis with specific antibodies for complement component 5a Receptor (C5aR), CD46 (MCP, Membrane Cofactor Protein), CD55 (DAF, Decay Accelerating Factor), CD59, p-selectin, TF and TFPI. Mutations and polymorphisms analysis in the complement regulator genes were also performed. Results. In APS patients, both in pregnant and non-pregnant conditions, we found higher plasma levels of C5a, C5b-9 and TF compared to healthy subjects. In APS placenta, C5aR, C5b-9 and p-selectin levels were higher than in controls, conversely, CD46, CD55 and CD59 levels were lower compared to healthy subjects. Since clinical management of pregnancy in APS requires anticoagulant therapy (heparin), plasma and placenta content of TF and TFPI were affected by this treatment. In APS placenta donors, we did not find mutations or allele variances in the CD46, CD55 and CD59 genes.Conclusions. Our data suggest complement activation both in pregnant and non-pregnant APS patients as supported by the increase in key molecules from complement system. In this study, higher levels of activated complement molecules were associated to a proinflammatory and procoagulant state in APS subjects. The lower placental CD46, CD55 and CD59 expression may impair local protection, favoring local complement hyperactivation and leading to inflammation, thrombosis, tissue damage and possible fetal death, but further studies are necessary to better understand the mechanisms involved in complement dysregulation in APS syndrome.